Chiba/Schedule

From 2007.igem.org

AHL TEAM

Fukutomi/Tamaki/Kazama

  • Let's make AHL Sender and Receiver
  • aiiA Receiver(under constant promoter)
  • aiiA Receiver(under lux promter)
  • AHL test(diffusion and concentration gradient)
  • AHL test on LB plus methionine plate
  • Sensitive Receiver(LuxR mutant)
  • Super Sender(metK+LuxI)

FliC TEAM

Lajiwara/Guishiken/Tominaga

  • pUC19-FliC-Hisの作製
    • LINKER LIGATION
  1. pUC19-FliCをInverse PCR(五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR)⇒vectorの作成 done
    1. Check Size done
    2. Digestion(EcoRI,NcoI) done
    3. Zymo Clean(40μ)→SAP(50μ系)→Zymo Clean(30μ) done
  2. Histag,Histag-antiをアニール done
    1. Digestion(EcoRI,NcoI) done
  3. Ligation done
  4. Transformation done
  5. miniprep done
  6. Digestion test done
  7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done
  • RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ(RBSが結合する確率が高い)
  1. 1のvectorにRBSを取り付ける done
  2. 2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) done
  3. 1,2をLigation done
  4. Transformation done
  5. Miniprep done
  6. Digestion test
  • Check Protein
  1. SDS-PAGE
  2. Western-Bloting
  3. Magnetic Beans
  • Toxicity Test
  • 伝達事項~9/11にすること
  1. タッパーを買う×10くらい
  2. 下の研究室から金属イオンをもらう
  3. Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
  4. M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える→既に加えました
  5. M9培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存(おそらく午前中に集菌できると思います)
  6. SDS、Western-Blotting
  7. Toxicity test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る