Paris/July 19

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== FtsZ<sup>TS</sup> strain screening ==
== FtsZ<sup>TS</sup> strain screening ==
We want to test these strains :
We want to test these strains :
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** One at 30°C
** One at 30°C
** One at 42°C
** One at 42°C
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Results : every strain grew at 30 and 42°C => fail.
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Results : every strain grew at 30 and 42°C => FAIL
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>br
+
 
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>br
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== Overnight Bacterial cultures ==
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== ON Bacterial cultures ==
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We launched several cultures :  
We launched several cultures :  
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'''Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks'''
'''Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks'''
-
 
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== Digestions ==
 
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Je voulais faire une ribambelle de digestions
 
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Je voulais faire une ribambelle de digestions. Malheureusement, la plaque UV a planté (donc impossible de faire les analyses intermédiaires dans les doubles digestions croisés, ni de purifier les produits de digestion !) j’ai donc renoncé à faire les digestions ce soir !
 
-
 
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La description détaillée des réactions de digestions à réaliser est dans le cahier de manip. Je ferais les digestions (et les ligations-transformations qui suivent logiquement) Samedi si la plaque UV est guérie !
 
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Remarque d’ordre général sur les double digestions par les enzymes a biobriques :
 
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D’après le site du fabriquant (New England Biolabs), les tampons pour double digéstions optimales ne sont pas celles que vous avez utilisés.
 
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EcoRI a son propre tampon (NEB-U), je pense que c’est pour cela que les dig. Avec EcoRI n’ont pas fonctionné.
 
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Pour le détail : tampons en double digestions :
 
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http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp
 
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pour plus de détail sur les doubles dig. Comptant EcoRI :
 
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http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/buffer_activity_unique_re.asp
 
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== PCR ==
 
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Je voulais faire des PCR, mais les fiches des oligos stocks n’étant pas dans le classeur= connais pas les [] des oligos stocks, peux pas faire les dilutions à 10μM, peux pas lancer les PCR !
 
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Dommage
 
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Plus d’organisation svp !
 

Latest revision as of 17:48, 7 October 2007

yesterday -- tomorrow

FtsZTS strain screening

We want to test these strains :

  • 121.4
  • 121.5
  • 121.6
  • 129
  • 1.129
  • DCR 14.1
  • DCR 14.2
  • DCR 14.3

I made glycerol stock of these strains, stored in the freezer. Test :

  • Spread these strains on two plates (preheated before spreading) :
    • One at 30°C
    • One at 42°C

Results : every strain grew at 30 and 42°C => FAIL

Overnight Bacterial cultures

We launched several cultures :

  • MG1655 -> to do transductions tomorrow (don't forget the DAP, David!)
  • pJ23107_J61002 clones 3 & 4 in LB-Amp liquid; also striping clones 3-18 on LB-Amp Agar plates
  • I0500_pSB2K3 clones 1 & 2 in LB-Kan liquid medium
  • B0015_pSB1AK3 clones 3 & 4 in LB-Kan liquid medium

Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks

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