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	*LINKER LIGATION		*LINKER LIGATION
	**pUC19-FliC(vector)の制作		**pUC19-FliC(vector)の制作
-	#Inverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）	+	#pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）
	##Check Size		##Check Size
	##Digestion(EcoRI,NcoI)		##Digestion(EcoRI,NcoI)
	##Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出）		##Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出）
-		+	#Histag,Histag-antiをアニール
-		+	##Digestion(EcoRI,NcoI)
-	#lasmid check	+	#Ligation
-	##Digestion Test	+	#Transformation
-	##Sequence	+	#miniprep
-	#Expression Test of a FliC-Histag	+	#Digestion test
-	##SDS-PAGE	+	#Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認
-	##Western-Blotting	+
-	##Magnetic beads	+

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Revision as of 05:23, 2 September 2007

Lux TEAM

FliC TEAM

• LINKER LIGATION
  • pUC19-FliC(vector)の制作

1. pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）
   1. Check Size
   2. Digestion(EcoRI,NcoI)
   3. Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出）
2. Histag,Histag-antiをアニール
   1. Digestion(EcoRI,NcoI)
3. Ligation
4. Transformation
5. miniprep
6. Digestion test
7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認