From 2007.igem.org

Revision as of 05:25, 2 September 2007 (view source) Masahiro (Talk | contribs) ← Older edit		Revision as of 14:21, 3 September 2007 (view source) Masahiro (Talk | contribs) Newer edit →
Line 4:		Line 4:
	*pUC19-FliC-Hisの作製		*pUC19-FliC-Hisの作製
	**LINKER LIGATION		**LINKER LIGATION
-	#pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）	+	#pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）⇒vectorの作成 '''done'''
-	##Check Size	+	##Check Size '''done'''
-	##Digestion(EcoRI,NcoI)	+	##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done'''
-	##Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出）	+	##Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出） '''done'''
-	#Histag,Histag-antiをアニール	+	#Histag,Histag-antiをアニール '''done'''
-	##Digestion(EcoRI,NcoI)	+	##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done'''
-	#Ligation	+	#Ligation '''done'''
-	#Transformation	+	#Transformation '''done'''
-	#miniprep	+	#miniprep '''done'''
-	#Digestion test	+	#Digestion test '''done'''
-	#Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認	+	#Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 '''done'''
		+	*RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ（RBSが結合する確率が高い）
		+	#1のvectorにRBSを取り付ける

---

Revision as of 14:21, 3 September 2007

Lux TEAM

FliC TEAM

• pUC19-FliC-Hisの作製
  • LINKER LIGATION

1. pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）⇒vectorの作成 done
   1. Check Size done
   2. Digestion(EcoRI,NcoI) done
   3. Zymo Clean(40μ溶出)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ溶出） done
2. Histag,Histag-antiをアニール done
   1. Digestion(EcoRI,NcoI) done
3. Ligation done
4. Transformation done
5. miniprep done
6. Digestion test done
7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done

• RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ（RBSが結合する確率が高い）

1. 1のvectorにRBSを取り付ける