Chiba/Lab Notebook

From 2007.igem.org

(Difference between revisions)
Line 26: Line 26:
#Western-Bloting
#Western-Bloting
#Magnetic Beans
#Magnetic Beans
 +
*伝達事項
 +
#タッパーを買う×10くらい
 +
#下の研究室から金属イオン(おそらくクロライド)をもらう→どんなふうにくれるのだろう?
 +
#Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
 +
#M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える
 +
#M9培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存
 +
#SDS、Western-Blotting
 +
#Toxicity test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること
 +
 ⇒Swamテストと同様に写真に撮る

Revision as of 11:54, 10 September 2007

AHL TEAM

FliC TEAM

  • pUC19-FliC-Hisの作製
    • LINKER LIGATION
  1. pUC19-FliCをInverse PCR(五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR)⇒vectorの作成 done
    1. Check Size done
    2. Digestion(EcoRI,NcoI) done
    3. Zymo Clean(40μ溶出)→SAP(50μ系)→Zymo Clean(30μ溶出) done
  2. Histag,Histag-antiをアニール done
    1. Digestion(EcoRI,NcoI) done
  3. Ligation done
  4. Transformation done
  5. miniprep done
  6. Digestion test done
  7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done
  • RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ(RBSが結合する確率が高い)
  1. 1のvectorにRBSを取り付ける done
  2. 2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) done
  3. 1,2をLigation done
  4. Transformation done
  5. Miniprep done
  6. Digestion test
  • Check Protein
  1. SDS-PAGE
  2. Western-Bloting
  3. Magnetic Beans
  • 伝達事項
  1. タッパーを買う×10くらい
  2. 下の研究室から金属イオン(おそらくクロライド)をもらう→どんなふうにくれるのだろう?
  3. Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
  4. M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える
  5. M9培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存
  6. SDS、Western-Blotting
  7. Toxicity test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること

 ⇒Swamテストと同様に写真に撮る