Chiba/Lab Notebook
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##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done''' | ##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done''' | ||
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#Histag,Histag-antiをアニール '''done''' | #Histag,Histag-antiをアニール '''done''' | ||
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#Western-Bloting | #Western-Bloting | ||
#Magnetic Beans | #Magnetic Beans | ||
- | * | + | *伝達事項~9/11にすること |
#タッパーを買う×10くらい | #タッパーを買う×10くらい | ||
- | # | + | #下の研究室から金属イオン(おそらくクロライド)をもらう→どんな状態で? |
#Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも | #Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも | ||
#M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える | #M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える |
Revision as of 13:58, 10 September 2007
AHL TEAM
FliC TEAM
- pUC19-FliC-Hisの作製
- LINKER LIGATION
- pUC19-FliCをInverse PCR(五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR)⇒vectorの作成 done
- Check Size done
- Digestion(EcoRI,NcoI) done
- Zymo Clean(40μ)→SAP(50μ系)→Zymo Clean(30μ) done
- Histag,Histag-antiをアニール done
- Digestion(EcoRI,NcoI) done
- Ligation done
- Transformation done
- miniprep done
- Digestion test done
- Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done
- RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ(RBSが結合する確率が高い)
- 1のvectorにRBSを取り付ける done
- 2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) done
- 1,2をLigation done
- Transformation done
- Miniprep done
- Digestion test
- Check Protein
- SDS-PAGE
- Western-Bloting
- Magnetic Beans
- 伝達事項~9/11にすること
- タッパーを買う×10くらい
- 下の研究室から金属イオン(おそらくクロライド)をもらう→どんな状態で?
- Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
- M9培養のODを測る。0.2~0.4でIPTGを2μ(←たぶん)加える
- M9培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存
- SDS、Western-Blotting
- Toxicity test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること
⇒Swamテストと同様に写真に撮る