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	#SDS、Western-Blotting		#SDS、Western-Blotting
	#Toxicity　test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る		#Toxicity　test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る
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Revision as of 14:14, 10 September 2007

AHL TEAM

FliC TEAM

Lajiwara/Guishiken/Tominaga

• pUC19-FliC-Hisの作製
  • LINKER LIGATION

1. pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）⇒vectorの作成 done
   1. Check Size done
   2. Digestion(EcoRI,NcoI) done
   3. Zymo Clean(40μ)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ） done
2. Histag,Histag-antiをアニール done
   1. Digestion(EcoRI,NcoI) done
3. Ligation done
4. Transformation done
5. miniprep done
6. Digestion test done
7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done

• RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ（RBSが結合する確率が高い）

1. 1のvectorにRBSを取り付ける done
2. 2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) done
3. 1,2をLigation done
4. Transformation done
5. Miniprep done
6. Digestion test

• Check Protein

1. SDS-PAGE
2. Western-Bloting
3. Magnetic Beans

• Toxicity Test
• 伝達事項～9/11にすること

1. タッパーを買う×１０くらい
2. 下の研究室から金属イオンをもらう
3. Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
4. M９培養のODを測る。0.2～0.4でIPTGを２μ（←たぶん）加える
5. M９培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存
6. SDS、Western-Blotting
7. Toxicity　test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る

• Daily