NYMU Taipei/Protocols2/Signal peptides and insulin A, B chain

<p><font size="2" face="Courier New">BC005255: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&amp;id=13528923</font></p>
<p><font size="2" face="Courier New"><br />
</font><font size="2" face="Courier New" color="green">AAG TCTAGA aaagaggagaaa ACTAG</font><font size="2" face="Courier New" color="green">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp; | 5' ext + xba1 +rbs+ spacer</font><font size="2" face="Courier New"><br />
</font><font size="2" face="Courier New"><font color="#008080"><u> atggacaaattcgacgct</u></font>aatcgccgcaaattgctggcgcttggtggcgttgcactcggtgccgccatcctg<font color="#800080"><u>ccgacc</u><u>cctgcgtttgca</u></font> | ycbK TAT signal peptide<br />
</font><font size="2" face="Courier New"><font color="#ff6600"><u>GGCATTGTGGAACAATGC</u></font>TGTACCAGCATCTGCTCCCTCTACCAG<font color="#99cc00"><font color="#000000">CTGGAG</font><u>AACTACTGCAACTAGTAG</u></font></font><font size="2" face="Courier New"> &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; | insulin A chain</font><font size="2"><br />
</font> <font size="2" face="Courier New" color="#000000">tactagtagcggccgctgcag&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; | spe1+not1+pst1 site</font><font size="2" face="Courier New"><br />
<font color="#0000ff">GAA&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; |</font> 3' extending region</font><font size="2" face="Courier New">&nbsp;</font></p>
<hr width="100%" size="2" />
<p><font size="2" face="Courier New"><br />
</font><font size="2" face="Courier New" color="green">AAG TCTAGA aaagaggagaaa ACTAG</font><font size="2" face="Courier New" color="green">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; | 5' ext+ xba1 +rbs+ spacer</font><font size="2" face="Courier New"><br />
</font> <font size="2" face="Courier New"><u><font color="#008080">atggacaaattcgacgct</font></u>aatcgccgcaaattgctggcgcttggtggcgttgcactcggtgccgccatcctg<font color="#800080"><u>ccgacc</u><u>cctgcgtttgca</u></font> &nbsp; &nbsp; &nbsp; | ycbK TAT signal peptide</font><font size="2" face="Courier New"><br />
</font> <font size="2" face="Courier New"><font color="#ff0000"><u>TTTGTGAACCAACACCTG</u></font>TGCGGCTCACACCTGGTGGAAGCTCTCTACCTAGTGTGCGGGGAACGAGGCTTC<font color="#99cc00"><font color="#000000">TTCTAC</font><u>ACACCCAAGACCTAGTAG</u></font></font><font size="2" face="Courier New"> | insulin B chain<br />
</font><font size="2" face="Courier New" color="#000000">tactagtagcggccgctgcag&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;&nbsp; |spe1+not1+pst1 site</font><font size="2" face="Courier New"><font color="#cc99ff"><br />
</font></font><font size="2" face="Courier New" color="#0000ff">GAA</font><font size="2" face="Courier New"> &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; | 3' extending region</font><font size="2" face="Courier New"><br />
</font></p>
<p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;</font></p>
<p><font size="2" face="Courier New">Common primer: <br />
</font></p>
<ol>
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; TAT_Forward: </font><font size="2" face="Courier New" color="green">AAG TCTAGA aaagaggagaaa ACTAG </font><font size="2" face="Courier New"><font color="#008080"><u> </u>atggacaaattcgacgct</font></font></p>
    </li>
</ol>
<p><font size="2" face="Courier New"><br />
For TAT-insulin A:</font></p>
<ol start="2">
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;InsA_TAT_Reverse: ggctggggacgcaaacgtCCGTAACACCTTGTTACG <br />
    </font></p>
    </li>
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">InsA_InsA_Forward: </font><font size="2" face="Courier New"><font color="#800080"><u>ccgacc</u><u>cctgcgtttgca</u></font></font><font size="2" face="Courier New"><font color="#ff6600"><u>GGCATTGTGGAACAATGC</u></font></font></p>
    </li>
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; InsA_Reverse: TTGATGACGTTGATCATCatgatcatcgccggcgacgtcCTT<br />
    </font></p>
    </li>
</ol>
<p><font size="2" face="Courier New"><br />
For TAT-insulin B:</font></p>
<ol start="5">
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;InsB_TAT_Reverse: ggctggggacgcaaacgtAAACACTTGGTTGTGGAC<br />
    </font></p>
    </li>
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">InsB_InsB_Forward: </font><font size="2" face="Courier New"><font color="#800080"><u>ccgacc</u><u>cctgcgtttgca</u></font></font><font size="2" face="Courier New"><font color="#ff0000"><u>TTTGTGAACCAACACCTG</u></font></font></p>
    </li>
    <li>
    <p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp; InsB_Reverse: TGTGGGTTCTGGATCATCatgatcatcgccggcgacgtcCTT<br />
    </font></p>
    </li>
</ol>
<p><font size="2" face="Courier New">&nbsp;</font></p>
<p><font size="2" face="Courier New">[[image:rbs_tat_ins.jpg]]</font></p>