Chiba/Flagella/Making FliC-his

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*design primer
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*エキサイトPCR
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**design primer
FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)
FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)
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**pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに
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pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに
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[PCR表]
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***[PCR表]
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[混ぜ表]
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***[混ぜ表]
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*Template 1μL
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**Template 1μL
**Primer(FとR) 5μL
**Primer(FとR) 5μL
**10×buffer 10μL
**10×buffer 10μL

Revision as of 03:28, 27 October 2007

  1. pUC19 vectorにFliCをコードする遺伝子を挿入→pUC19-FliC(島田さんから)
  2. エキサイトPCR
  3. design insert(ヒスチジンタグ)
  4. pUC19-FliC vector とinsertオリゴをライゲーション.
  5. GelCheck


  • エキサイトPCR
    • design primer

FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267) pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに

      • [PCR表]
      • [混ぜ表]
    • Template 1μL
    • Primer(FとR) 5μL
    • 10×buffer 10μL
    • dNTPmix
    • vent
    • dH2O


  • design insert
    • six histidine loop peptide ("His-loop")
    • アミノ酸配列-Ser-Ser-His-His-His-His-His-His-Ser-Ser
    • encoded by the oligo 5'-TCT-TCT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-TCC-TCC-3'
    • and anti oligo 5'-GGA-GGA-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-AGA-AGA-3'
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