Paris/July 19

(Difference between revisions)

Revision as of 15:19, 30 July 2007

We want to test these strains :

I made glycerol stock of these strains, stored in the freezer. Test :

Spread these strains on two plates (preheated before spreading) :
- One at 30°C
- One at 42°C

Results : every strain grew at 30 and 42°C => fail. >br >br

We launched several cultures :

MG1655 -> to do transductions tomorrow (don't forget the DAP, David!)
pJ23107_J61002 clones 3 & 4 in LB-Amp liquid; also striping clones 3-18 on LB-Amp Agar plates
I0500_pSB2K3 clones 1 & 2 in LB-Kan liquid medium
B0015_pSB1AK3 clones 3 & 4 in LB-Kan liquid medium

Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks

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 '''Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks'''
-== Digestions ==
- Je voulais faire une ribambelle de digestions
-Je voulais faire une ribambelle de digestions. Malheureusement, la plaque UV a planté (donc impossible de faire les analyses intermédiaires dans les doubles digestions croisés, ni de purifier les produits de digestion !) j’ai donc renoncé à faire les digestions ce soir !
-La description détaillée des réactions de digestions à réaliser est dans le cahier de manip. Je ferais les digestions (et les ligations-transformations qui suivent logiquement) Samedi si la plaque UV est guérie !
-Remarque d’ordre général sur les double digestions par les enzymes a biobriques :
-D’après le site du fabriquant (New England Biolabs), les tampons pour double digéstions optimales ne sont pas celles que vous avez utilisés.
-EcoRI a son propre tampon (NEB-U), je pense que c’est pour cela que les dig. Avec EcoRI n’ont pas fonctionné.
-Pour le détail : tampons en double digestions :
-http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp
-pour plus de détail sur les doubles dig. Comptant EcoRI :
-http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/buffer_activity_unique_re.asp