Chiba/Quorum Sensing
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Methionineを培地に加えることでSenderはより多くのAHLを合成するのだろうか | Methionineを培地に加えることでSenderはより多くのAHLを合成するのだろうか | ||
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LuxRのアミノ酸 Ile45->Phe, Ser116->Ala この変異を入れ、Sensitiveなレシーバーを作る | LuxRのアミノ酸 Ile45->Phe, Ser116->Ala この変異を入れ、Sensitiveなレシーバーを作る | ||
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Revision as of 08:57, 23 October 2007
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Quorum Sensing
AHL test
Quorum Sensingをスイッチとして利用するために以下の実験をした。
pLuxをアクティブにするためにはどのくらいのSenderが必要なのだろうか SenderとしてLuxIを発現する株はどのようなものがいいのか
- AHL合成経路
Methionineを培地に加えることでSenderはより多くのAHLを合成するのだろうか
Result
濃度勾配を利用するために
- aiiAを発現させ、AHLが広がりすぎないようにする
- aiiAをpluxとinverterの下に置き、AHLが低い濃度ではaiiAを発現させAHLを分解させ、高い濃度ではaiiAが発現しないような回路を作る。
- thresholdの境がもっとはっきりするようになるだろう。
Quorum Sensing能力をあげる
- SenderがもっとAHLを合成するようにする。
- AHL合成経路でS-adenosyl Methionineのをさらに合成させることでAHLの量を増やす。
metKを発現するSenderの回路を作る。
- Receiverをもっと高感度にする。
- 論文で読んだmutant LuxRを作成し、AHLの濃度が低くてもpLuxを活性化する。
(Collins, C. H., Arnold, F. H. & Leadbetter, J. R. Directed evolution of Vibrio fischeri LuxR for increased sensitivity to a broad spectrum of acyl-homoserine lactones. Mol. Microbiol. 55, 712–723 (2005).)
LuxRのアミノ酸 Ile45->Phe, Ser116->Ala この変異を入れ、Sensitiveなレシーバーを作る
