Chiba/Making Marimo
From 2007.igem.org
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*Change puc19 vector into biobrick's vector. | *Change puc19 vector into biobrick's vector. | ||
<br>puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。 | <br>puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。 | ||
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*Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI). | *Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI). | ||
<br>制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。 | <br>制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。 | ||
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#Insert blunt end on one side and ApaI on the other side. | #Insert blunt end on one side and ApaI on the other side. | ||
#Similarly do PCR and ligation in the vector side. | #Similarly do PCR and ligation in the vector side. | ||
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<br>FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。 | <br>FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。 | ||
#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。 | #片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。 | ||
Revision as of 00:15, 27 October 2007
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Introduction | Project Design ( 1.Sticky Hands | 2.Communication | 3.Size Control ) | Making Marimos | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿 |
（このページの存在意義について話し合いたいです古）
- クオラムとfliC-hisを合体させた実験てやりました？
- やってないです・・・・
- flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ？
- ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
- ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない？by とよたろ
Making Marimos
1.2.3をくっつけてマリモをつくる！の図．<-Our goal??
Parts Construction
FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素（＿＿）が入っているため，シグナル側のプラスミドとは分けた．
Because FliC have restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI)used in Biobrick, we divide into plasmid of FliC and one of signal.
FliC-His generator
- His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。
We regulate His-tagged FliC by lux promoter. If LuxR is expressed, bacteria can express FliC by Quorum Seinsing.
- Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。
FliC-his biobrick
What is needed(必要なこと)
- Change puc19 vector into biobrick's vector.
puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
- Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).
制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
- Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.
- Insert blunt end on one side and ApaI on the other side.
- Similarly do PCR and ligation in the vector side.
FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。
#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。 #vector側も同様にPCRしLigationさせる。
Experiments
Stick-or-not Assay
Sample
- Plux-fliC
- Pbad-fliC
- ここのデータは誰が担当かな？どこまでデータが出せる？byとよたろ
Results
- Swarm test
- Stick test
