Paris/July 19

From 2007.igem.org

(Difference between revisions)
(→ON Bacterial cultures)
Line 26: Line 26:
'''Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks'''
'''Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks'''
 +
 +
== Digestions ==
 +
 +
Je voulais faire une ribambelle de digestions
 +
 +
Je voulais faire une ribambelle de digestions. Malheureusement, la plaque UV a planté (donc impossible de faire les analyses intermédiaires dans les doubles digestions croisés, ni de purifier les produits de digestion !) j’ai donc renoncé à faire les digestions ce soir !
 +
 +
La description détaillée des réactions de digestions à réaliser est dans le cahier de manip. Je ferais les digestions (et les ligations-transformations qui suivent logiquement) Samedi si la plaque UV est guérie !
 +
 +
Remarque d’ordre général sur les double digestions par les enzymes a biobriques :
 +
D’après le site du fabriquant (New England Biolabs), les tampons pour double digéstions optimales ne sont pas celles que vous avez utilisés.
 +
 +
EcoRI a son propre tampon (NEB-U), je pense que c’est pour cela que les dig. Avec EcoRI n’ont pas fonctionné.
 +
 +
Pour le détail : tampons en double digestions :
 +
 +
http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp
 +
 +
pour plus de détail sur les doubles dig. Comptant EcoRI :
 +
 +
http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/buffer_activity_unique_re.asp
 +
 +
 +
== PCR ==
 +
 +
Je voulais faire des PCR, mais les fiches des oligos stocks n’étant pas dans le classeur= connais pas les [] des oligos stocks, peux pas faire les dilutions à 10μM, peux pas lancer les PCR !
 +
 +
Dommage
 +
 +
Plus d’organisation svp !

Revision as of 22:21, 19 July 2007

Contents

FtsZTS strain screening

We want to test these strains :

  • 121.4
  • 121.5
  • 121.6
  • 129
  • 1.129
  • DCR 14.1
  • DCR 14.2
  • DCR 14.3

I made glycerol stock of these strains, stored in the freezer. Test :

  • Spread these strains on two plates (preheated before spreading) :
    • One at 30°C
    • One at 42°C

Results : every strain grew at 30 and 42°C => fail. >br >br

ON Bacterial cultures

We launched several cultures :

  • MG1655 -> to do transductions tomorrow (don't forget the DAP, David!)
  • pJ23107_J61002 clones 3 & 4 in LB-Amp liquid; also striping clones 3-18 on LB-Amp Agar plates
  • I0500_pSB2K3 clones 1 & 2 in LB-Kan liquid medium
  • B0015_pSB1AK3 clones 3 & 4 in LB-Kan liquid medium

Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks

Digestions 

Je voulais faire une ribambelle de digestions

Je voulais faire une ribambelle de digestions. Malheureusement, la plaque UV a planté (donc impossible de faire les analyses intermédiaires dans les doubles digestions croisés, ni de purifier les produits de digestion !) j’ai donc renoncé à faire les digestions ce soir !

La description détaillée des réactions de digestions à réaliser est dans le cahier de manip. Je ferais les digestions (et les ligations-transformations qui suivent logiquement) Samedi si la plaque UV est guérie !

Remarque d’ordre général sur les double digestions par les enzymes a biobriques : D’après le site du fabriquant (New England Biolabs), les tampons pour double digéstions optimales ne sont pas celles que vous avez utilisés.

EcoRI a son propre tampon (NEB-U), je pense que c’est pour cela que les dig. Avec EcoRI n’ont pas fonctionné.

Pour le détail : tampons en double digestions :

http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp

pour plus de détail sur les doubles dig. Comptant EcoRI :

http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/buffer_activity_unique_re.asp


PCR

Je voulais faire des PCR, mais les fiches des oligos stocks n’étant pas dans le classeur= connais pas les [] des oligos stocks, peux pas faire les dilutions à 10μM, peux pas lancer les PCR !

Dommage

Plus d’organisation svp !

Retrieved from "http://2007.igem.org/wiki/index.php/Paris/July_19"