Chiba/Goal

From 2007.igem.org

(Difference between revisions)

Revision as of 13:14, 23 October 2007

Introduction | Project Design | Engeneering Flagella | Quorum Sensing | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿

Marimo をつくる

鞭毛間吸着テスト
有限確認テスト
りんご飴アッセイ

鞭毛間吸着test

senderとreceiver同士がHis-Tagで吸着しているかを確認するためのテストである。このテストでは、His-tag同士の吸着を阻害するimidazolを用いて行う。

1.Senderとreceiverをそれぞれ培養し、receiverの培養液の中に、senderを１滴加える。
2.その中に金属イオンを加えると、senderとreceiverが鞭毛同士で吸着し始める。
3.ある程度吸着したら、imidazolを加えたものとそうでないものをプレートにまく。
4.imidazolを加えたものはばらばらのコロニーができ、imidazolなしのものは、senderとreceiverが
  くっついているので、くっついたコロニーができる。

有限確認test

マリモを作る前の段階として、マリモの成長が有限の大きさで止まるか２次元で確認するためのテスト。

1.Senderとreceiverをそれぞれ培養し、receiverの培養液の中に、senderを１滴加える。
2.その中に金属イオンを加えると、senderとreceiverが鞭毛同士で吸着し始める。
3.ある程度吸着したら、imidazolを加えたものとそうでないものをプレートにまく。
4.imidazolを加えたものはばらばらのコロニーができ、imidazolなしのものは、senderとreceiverが
  くっついているので、くっついたコロニーができる。

　　1.senderとreceiverを試験管でそれぞれ培養する。　2.receiverをプレートに均一にまき、senderを真ん中に少量スポットし一晩培養する。　3.senderの近く（GFPを発現している)、中間、遠く（GFPを発現していない）から数箇所ずつ菌をとってそれぞれ希釈液を作　　る。　4.希釈した菌にCo2+を加えてプレートにまく。　5.FliCを発現していなかったreceiverは、ばらばらのコロニーを作り、FliCを発現していたreceiverは塊になったコロ　　　ニーを作る。

Views