Chiba/Quorum Sensing
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===AHL生産能力 Assay=== | ===AHL生産能力 Assay=== | ||
Quorum Sensingをスイッチとして利用するために以下の実験をした。 | Quorum Sensingをスイッチとして利用するために以下の実験をした。 | ||
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| + | ===To Make an AHL Concentration Gradient=== | ||
| + | *aiiA (autoinducer inactivation enzyme A): degradate AHLs． | ||
*aiiAを発現させ、AHLが広がりすぎないようにする | *aiiAを発現させ、AHLが広がりすぎないようにする | ||
*aiiAをpluxとinverterの下に置き、AHLが低い濃度ではaiiAを発現させAHLを分解させ、高い濃度ではaiiAが発現しないような回路を作る。 | *aiiAをpluxとinverterの下に置き、AHLが低い濃度ではaiiAを発現させAHLを分解させ、高い濃度ではaiiAが発現しないような回路を作る。 | ||
Revision as of 14:22, 23 October 2007
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Introduction | Project Design | Engeneering Flagella | Quorum Sensing | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿 |
Our Aim
About Quorum Sensing
クオラムセシングの説明
Experiments
AHL生産能力 Assay
Quorum Sensingをスイッチとして利用するために以下の実験をした。
- pLuxをアクティブにするためにはどのくらいのSenderが必要なのだろうか
- SenderとしてAHLを生産する能力の高い株は？（SenderとしてLuxIを発現する株はどのようなものがいいのか）
- AHLのprecursurであるMethionineを培地に加えることで，Senderはより多くのAHLを合成するのだろうか？
- AHL合成経路
Result
To Make an AHL Concentration Gradient
- aiiA (autoinducer inactivation enzyme A): degradate AHLs．
- aiiAを発現させ、AHLが広がりすぎないようにする
- aiiAをpluxとinverterの下に置き、AHLが低い濃度ではaiiAを発現させAHLを分解させ、高い濃度ではaiiAが発現しないような回路を作る。
- thresholdの境がもっとはっきりするようになるだろう。
Quorum Sensing能力をあげる
- SenderがもっとAHLを合成するようにする。
- AHL合成経路でS-adenosyl Methionineのをさらに合成させることでAHLの量を増やす。
metKを発現するSenderの回路を作る。
- Receiverをもっと高感度にする。
- 論文で読んだmutant LuxRを作成し、AHLの濃度が低くてもpLuxを活性化する。
(Collins, C. H., Arnold, F. H. & Leadbetter, J. R. Directed evolution of Vibrio fischeri LuxR for increased sensitivity to a broad spectrum of acyl-homoserine lactones. Mol. Microbiol. 55, 712–723 (2005).)
LuxRのアミノ酸 Ile45->Phe, Ser116->Ala この変異を入れ、Sensitiveなレシーバーを作る
