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	(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)		(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)
-	*Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)	+	*Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).
		+	(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)
	*Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.		*Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.

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Revision as of 00:17, 27 October 2007

Introduction | Project Design ( 1.Sticky Hands | 2.Communication | 3.Size Control ) | Making Marimos | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿

（このページの存在意義について話し合いたいです古）

• クオラムとfliC-hisを合体させた実験てやりました？
• やってないです・・・・
• flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ？
• ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
• ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない？by とよたろ

Making Marimos

1.2.3をくっつけてマリモをつくる！の図．<-Our goal??

Parts Construction

FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素（＿＿）が入っているため，シグナル側のプラスミドとは分けた．
Because FliC have restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI)used in Biobrick, we divide into plasmid of FliC and one of signal.

FliC-His generator

• His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。
  

We regulate His-tagged FliC by lux promoter. If LuxR is expressed, bacteria can express FliC by Quorum Seinsing.

• Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。

FliC-his biobrick

What is needed(必要なこと)

• Change puc19 vector into biobrick's vector.

(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)

• Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).

(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)

• Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.

1. Insert blunt end on one side and ApaI on the other side.
2. Similarly do PCR and ligation in the vector side.

(FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。

1. 片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
2. vector側も同様にPCRしLigationさせる。)

Experiments

Stick-or-not Assay

Sample

• Plux-fliC
• Pbad-fliC
• ここのデータは誰が担当かな？どこまでデータが出せる？byとよたろ

Results

1. Swarm test
2. Stick test