From 2007.igem.org

Revision as of 03:08, 27 October 2007 (view source) Risa (Talk | contribs) ← Older edit		Revision as of 03:20, 27 October 2007 (view source) Risa (Talk | contribs) Newer edit →
Line 1:		Line 1:
-	*pUC19 vectorにFliCをコードする遺伝子を挿入→pUC19-FliC	+	#pUC19 vectorにFliCをコードする遺伝子を挿入→pUC19-FliC(島田さんから)
-	#design primer(エキサイトPCRのため)	+	#エキサイトPCR
-	[PCR表]FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)	+
-	#エキサイトPCR→pUC19-FliC-vector	+
	#design insert(ヒスチジンタグ)		#design insert(ヒスチジンタグ)
-	*six histidine loop peptide ("His-loop")
-	*-Ser-Ser-His-His-His-His-His-His-Ser-Ser,encoded by the oligo 5'-TCT-TCT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-TCC-TCC-3' and anti oligo 5'-GGA-GGA-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-AGA-AGA-3'
	#pUC19-FliC vector とinsertオリゴをライゲーション.		#pUC19-FliC vector とinsertオリゴをライゲーション.
		+	#GelCheck
		+
	[混ぜ表]		[混ぜ表]
	*Template1μL		*Template1μL
Line 12:		Line 10:
	*10×buffer10μL		*10×buffer10μL
	*dNT		*dNT
		+
		+	*design primer
		+	**[PCR表]FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)
		+	***pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに
		+
		+	*six histidine loop peptide ("His-loop")
		+	*アミノ酸配列-Ser-Ser-His-His-His-His-His-His-Ser-Ser
		+	*encoded by the oligo 5'-TCT-TCT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-TCC-TCC-3'
		+	*and anti oligo 5'-GGA-GGA-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-AGA-AGA-3'

---

Revision as of 03:20, 27 October 2007

1. pUC19 vectorにFliCをコードする遺伝子を挿入→pUC19-FliC(島田さんから)
2. エキサイトPCR
3. design insert(ヒスチジンタグ)
4. pUC19-FliC vector とinsertオリゴをライゲーション.
5. GelCheck

[混ぜ表]

• Template1μL
• Primer(FとR)5μL
• 10×buffer10μL
• dNT

• design primer
  • [PCR表]FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)
    • pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに

• six histidine loop peptide ("His-loop")
• アミノ酸配列-Ser-Ser-His-His-His-His-His-His-Ser-Ser
• encoded by the oligo 5'-TCT-TCT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-TCC-TCC-3'
• and anti oligo 5'-GGA-GGA-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-AGA-AGA-3'