From 2007.igem.org

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Making Marimos

1.2.3をくっつけてマリモをつくる！の図．<-Our goal??

Parts Construction

FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素（＿＿）が入っているため，シグナル側のプラスミドとは分けた．
Because FliC have restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI)used in Biobrick, we divide into plasmid of FliC and one of signal.

FliC-His generator

Experiment

• His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。
  

We regulate His-tagged FliC by lux promoter. If LuxR is expressed, bacteria can express FliC by Quorum Seinsing.

• Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。
  

Because the gene circuit of Quorum Sensing is on vector of colEI, we can use FliC and Quorum Sensing by using vector of p15A and do double transformation.

Results

not successful

FliC-his biobrick

Experiment

• Change puc19 vector into biobrick's vector.

(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)

• Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).

(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)

• Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.

1. Insert blunt end on one side and ApaI on the other side.
2. Similarly do PCR and ligation in the vector side.

(FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。

1. 片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
2. vector側も同様にPCRしLigationさせる。)

Results

Ligation is not successful.