Chiba/Flagella/Making FliC-his
From 2007.igem.org
- pUC19 vectorにFliCをコードする遺伝子を挿入→pUC19-FliC(島田さんから)
- エキサイトPCR
- design insert(ヒスチジンタグ)
- pUC19-FliC vector とinsertオリゴをライゲーション.
- GelCheck
- design primer
FliCの可変領域のうち、フィラメントの外側部分から５か所を選び、プライマーを設計(207,228,240,252,267)
- pUC19-FliCをpUC19-FliC-vectorに
[PCR表] [混ぜ表]
- Template 1μL
- Primer(FとR) 5μL
- 10×buffer 10μL
- dNTPmix
- vent
- dH2O
- design insert
- six histidine loop peptide ("His-loop")
- アミノ酸配列-Ser-Ser-His-His-His-His-His-His-Ser-Ser
- encoded by the oligo 5'-TCT-TCT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-CAT-TCC-TCC-3'
- and anti oligo 5'-GGA-GGA-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-ATG-AGA-AGA-3'
