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Marimo をつくる

• 鞭毛間吸着テスト
• 有限確認テスト
• りんご飴アッセイ

鞭毛間吸着test

senderとreceiver同士がHis-Tagで吸着しているかを確認するためのテストである。 このテストでは、His-tag同士の吸着を阻害するimidazolを用いて行う。

1.Senderとreceiverをそれぞれ培養し、receiverの培養液の中に、senderを１滴加える。
2.その中に金属イオンを加えると、senderとreceiverが鞭毛同士で吸着し始める。
3.ある程度吸着したら、imidazolを加えたものとそうでないものをプレートにまく。
4.imidazolを加えたものはばらばらのコロニーができ、imidazolなしのものは、senderとreceiverが
  くっついているので、くっついたコロニーができる。

有限確認test

マリモを作る前の段階として、マリモの成長が有限の大きさで止まるか２次元で確認するためのテストである。

1.senderとreceiverを試験管でそれぞれ培養する。
2.receiverをプレートに均一にまき、senderを真ん中に少量スポットし一晩培養する。
3.senderの近く（GFPを発現している)、中間、遠く（GFPを発現していない）から数箇所ずつ菌をとってそれぞれ希釈液を作る。
4.希釈した菌にCo2+を加えてプレートにまく。
5.FliCを発現していなかったreceiverは、ばらばらのコロニーを作り、FliCを発現していたreceiverは塊になったコロニーを作る。

　

りんご飴アッセイ