Chiba/Making Marimo
From 2007.igem.org
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Making Marimos
1.2.3をくっつけてマリモをつくる!の図.
Parts Construction
FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素(__)が入っているため,シグナル側のプラスミドとは分けた.
FliC-His generator
- His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。
- Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。
FliC-his biobrick
必要なこと
- puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
- 制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
- FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。
#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。 #vector側も同様にPCRしLigationさせる。
Experiments
Stick-or-not Assay
Sample
- Plux-fliC
- Pbad-fliC
Results
- Swarm test
- Stick test