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Quorum Sensing

AHL test

Quorum Sensingをスイッチとして利用するために以下の実験をした。

pLuxをアクティブにするためにはどのくらいのSenderが必要なのだろうか
enderとしてLuxIを発現する株はどのようなものがいいのか

• AHL合成経路

Methionineを培地に加えることでSenderはより多くのAHLを合成するのだろうか

濃度勾配を利用するために

• aiiAを発現させ、AHLが広がりすぎないようにする
• aiiAをpluxとinverterの下に置き、AHLが低い濃度ではaiiAを発現させAHLを分解させ、高い濃度ではaiiAが発現しないような回路を作る。
  • thresholdの境がもっとはっきりするようになるだろう。

Quorum Sensing能力をあげる

• SenderがもっとAHLを合成するようにする。
  • AHL合成経路でS-adenosyl Methionineのをさらに合成させることでAHLの量を増やす。

metKを発現するSenderの回路を作る。

• Receiverをもっと高感度にする。
  • 論文で読んだmutant LuxRを作成し、AHLの濃度が低くてもpLuxを活性化する。

(Collins, C. H., Arnold, F. H. & Leadbetter, J. R. Directed evolution of Vibrio fischeri LuxR for increased sensitivity to a broad spectrum of acyl-homoserine lactones. Mol. Microbiol. 55, 712–723 (2005).)

LuxRのアミノ酸　Ile45->Phe, Ser116->Ala　この変異を入れ、Sensitiveなレシーバーを作る