Chiba/Quorum Sensing
From 2007.igem.org
Introduction | Project Design ( 1.Sticky Hands | 2.Communication | 3.Size Control ) | Making Marimos | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿 |
Size Control: Our Aim
(マリモのサイズをコントロールしたい/しなくてはならない:どっち?)マリモのサイズをコントロールする為にはAHLの届く範囲をコントロールできればよい.
- AHLの届く範囲をコントロールするために以下の3つの方法を考えた:
- SenderのAHL生産能力をあげる
- ReceiverのAHL感受性をあげる
- AHL分解酵素aiiAを使う
1.Improving Sender
Design
AHL is synthesized from methionine via metK and luxI.
We thought combined overexpression of these 2 genes enhances the sender capacity.
AHLはFig.2のpathwayで合成されている.AHLを増加させるためにMetKを過剰発現させ,methionineを加えてみる。
Experiment
Result
Discussion
- 合成されたS-adenosyl Methionineがほかの代謝経路に使われて、AHL合成に使われなかったのだろうか.
2.Improving Receiver
Design
File:Mut LuxRの感度アップグラフ
Collins et al described the hyper-sensitive variants of luxR to AHL :(ref).
We created two types of sensitive luxR mutants.
Experiment
File:作ったmut luxr
sensitive luxR mutants の性能を以下の2つの方法で評価した。
Result
- mutant(I45F,S116A)はAHLを添加しなくてもGFPを発現した。
- mutant(I45F)はwild typeよりもGFPの発現が多くなった。(AHL 10nM)
mLuxRの論文引用したら? by tashiro
3.Aiia
(なんかいいタイトルないかな) Shrap sphereとか・・・by tashiro
Design1
図のように,AHLのシグナルが入るとaiiaを合成するような回路を考えた.Marimo全体がAHL quencherとして働く.Marimoの内側でAHLを分解し、Marimoの外側のAHL濃度を抑える.
Experiment
Result
- BBa_T9002との比較ではGFPははじめ発現しないが、しばらくするとGFPが発現するようになる。
Discussion
- 発現し始めた時が、AHLの濃度がaiiAの分解る能力を超えた時だと考えられる。
Design2
図のようにインバーターをかませた.高い濃度ではaiiAが発現しないためAHLは分解されない.AHLが低い濃度ではaiiAが発現しAHLを分解する.よってマリモの中心付近ではAHLを分解せず,外側へ行くと分解される.
Experiment
このパーツを作ろうとしたが、inverterを組み合わせた時点で終わってしまった。