From 2007.igem.org

Contents 1 FtsZTS strain screening 2 ON Bacterial cultures 3 Digestions 4 PCR

FtsZ^TS strain screening

We want to test these strains :

• 121.4
• 121.5
• 121.6
• 129
• 1.129
• DCR 14.1
• DCR 14.2
• DCR 14.3

I made glycerol stock of these strains, stored in the freezer. Test :

• Spread these strains on two plates (preheated before spreading) :
  • One at 30°C
  • One at 42°C

Results : every strain grew at 30 and 42°C => fail. >br >br

ON Bacterial cultures

We launched several cultures :

• MG1655 -> to do transductions tomorrow (don't forget the DAP, David!)
• pJ23107_J61002 clones 3 & 4 in LB-Amp liquid; also striping clones 3-18 on LB-Amp Agar plates
• I0500_pSB2K3 clones 1 & 2 in LB-Kan liquid medium
• B0015_pSB1AK3 clones 3 & 4 in LB-Kan liquid medium

Tomorrow (20/07/07): perform transduction (MG1655), minipreps, glycerol stocks

Digestions

Je voulais faire une ribambelle de digestions

Je voulais faire une ribambelle de digestions. Malheureusement, la plaque UV a planté (donc impossible de faire les analyses intermédiaires dans les doubles digestions croisés, ni de purifier les produits de digestion !) j’ai donc renoncé à faire les digestions ce soir !

La description détaillée des réactions de digestions à réaliser est dans le cahier de manip. Je ferais les digestions (et les ligations-transformations qui suivent logiquement) Samedi si la plaque UV est guérie !

Remarque d’ordre général sur les double digestions par les enzymes a biobriques : D’après le site du fabriquant (New England Biolabs), les tampons pour double digéstions optimales ne sont pas celles que vous avez utilisés.

EcoRI a son propre tampon (NEB-U), je pense que c’est pour cela que les dig. Avec EcoRI n’ont pas fonctionné.

Pour le détail : tampons en double digestions :

http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/double_digests.asp

pour plus de détail sur les doubles dig. Comptant EcoRI :

http://www.neb.com/nebecomm/tech_reference/restriction_enzymes/buffer_activity_unique_re.asp

PCR

Je voulais faire des PCR, mais les fiches des oligos stocks n’étant pas dans le classeur= connais pas les [] des oligos stocks, peux pas faire les dilutions à 10μM, peux pas lancer les PCR !

Dommage

Plus d’organisation svp !