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-	== Lux TEAM ==	+	== AHL TEAM ==
		+	Fukutomi/Tamaki/Kazama
-	== FliC TEAM ==	+	*Let's make AHL Sender and Receiver
		+	*aiiA Receiver(under constant promoter)
-	*LINKER LIGATION	+	*aiiA Receiver(under lux promter)
-	**inverse PCR	+
		+	*AHL test(diffusion and concentration gradient)
-	*Plasmid check	+	*AHL test on LB plus methionine plate
-	**Digestion Test	+
-	**Sequence	+
		+	*Sensitive Receiver(LuxR mutant)
-	*Expression Test of a FliC-Histag	+	*Super Sender(metK+LuxI)
-	**SDS-PAGE	+
-	**Western-Blotting	+	== FliC TEAM ==
-	**Magnetic beads	+	Lajiwara/Guishiken/Tominaga
		+	*pUC19-FliC-Hisの作製
		+	**LINKER LIGATION
		+	#pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）⇒vectorの作成 '''done'''
		+	##Check Size '''done'''
		+	##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done'''
		+	##Zymo Clean(40μ)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ） '''done'''
		+	#Histag,Histag-antiをアニール '''done'''
		+	##Digestion(EcoRI,NcoI) '''done'''
		+	#Ligation '''done'''
		+	#Transformation '''done'''
		+	#miniprep '''done'''
		+	#Digestion test '''done'''
		+	#Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 '''done'''
		+	*RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ（RBSが結合する確率が高い）
		+	#1のvectorにRBSを取り付ける '''done'''
		+	#2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) '''done'''
		+	#1,2をLigation '''done'''
		+	#Transformation '''done'''
		+	#Miniprep '''done'''
		+	#Digestion test
		+	*Check Protein
		+	#SDS-PAGE
		+	#Western-Bloting
		+	#Magnetic Beans
		+	*Toxicity Test
		+	*伝達事項～9/11にすること
		+	#タッパーを買う×１０くらい
		+	#下の研究室から金属イオンをもらう
		+	#Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
		+	#M９培養のODを測る。0.2～0.4でIPTGを２μ（←たぶん）加える→'''''既に加えました'''''
		+	#M９培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存（おそらく午前中に集菌できると思います）
		+	#SDS、Western-Blotting
		+	#Toxicity　test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る
		+	*[[chiba/Weekly|Weekly]]

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Latest revision as of 05:13, 12 September 2007

AHL TEAM

Fukutomi/Tamaki/Kazama

• Let's make AHL Sender and Receiver

• aiiA Receiver(under constant promoter)

• aiiA Receiver(under lux promter)

• AHL test(diffusion and concentration gradient)

• AHL test on LB plus methionine plate

• Sensitive Receiver(LuxR mutant)

• Super Sender(metK+LuxI)

FliC TEAM

Lajiwara/Guishiken/Tominaga

• pUC19-FliC-Hisの作製
  • LINKER LIGATION

1. pUC19-FliCをInverse PCR（五種類のF-Primer,R-Primer→15通りのPCR）⇒vectorの作成 done
   1. Check Size done
   2. Digestion(EcoRI,NcoI) done
   3. Zymo Clean(40μ)→SAP（50μ系）→Zymo Clean（30μ） done
2. Histag,Histag-antiをアニール done
   1. Digestion(EcoRI,NcoI) done
3. Ligation done
4. Transformation done
5. miniprep done
6. Digestion test done
7. Sequence→FliCに6×His配列が挿入されていることを確認 done

• RBSに問題有り→FliC領域の上流に開始コドンが二つ（RBSが結合する確率が高い）

1. 1のvectorにRBSを取り付ける done
2. 2-1産物をDigestion(HindⅢ,ApaⅠ) done
3. 1,2をLigation done
4. Transformation done
5. Miniprep done
6. Digestion test

• Check Protein

1. SDS-PAGE
2. Western-Bloting
3. Magnetic Beans

• Toxicity Test
• 伝達事項～9/11にすること

1. タッパーを買う×１０くらい
2. 下の研究室から金属イオンをもらう
3. Swamの結果を写真に撮る→Swam培地は壊れやすいので注意←タッパーを買った後のほうがいいかも
4. M９培養のODを測る。0.2～0.4でIPTGを２μ（←たぶん）加える→既に加えました
5. M９培養のODが2,0を超えたら集菌→冷凍保存（おそらく午前中に集菌できると思います）
6. SDS、Western-Blotting
7. Toxicity　test用のSwam培地を作る→金属イオン濃度を桁で振ること⇒Swamテストと同様に写真に撮る

• Weekly