Chiba/Week1

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== 8/17(Thu) ==
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*pUC-FliCのPCR
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==8/16(Wed)==
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===AHL Expression Test===
===AHL Expression Test===
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BiobrickのAHLsender&recieverを使ってシグナル伝達してるかテスト．
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'''BiobrickのAHLsender&recieverを使ってシグナル伝達してるかテスト'''
*使用したパーツ
*使用したパーツ
**Reciever: [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (TetP-LuxR-T-LuxP-GFP-T)
**Reciever: [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (TetP-LuxR-T-LuxP-GFP-T)
**Sender1:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03608 BBa_S03608] (LacP-LuxI)
**Sender1:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03608 BBa_S03608] (LacP-LuxI)
**Sender2:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI)
**Sender2:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI)
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*条件
 
**Strain:XL10
**Strain:XL10
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*条件
**液体培地(LB-Amp)
**液体培地(LB-Amp)
**固体培地(LB-Amp/1.5% Agar)
**固体培地(LB-Amp/1.5% Agar)
**SwarmPlate(Triptone-Amp/0.25% Agar)
**SwarmPlate(Triptone-Amp/0.25% Agar)
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*実験結果
+
*'''実験結果'''
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**（福富くんに聞く)
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**'''GFP発現した．AHLで伝達している．'''
**Sender2・[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI) の方がAHL放出量が多い
**Sender2・[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI) の方がAHL放出量が多い
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***使ったE.coli（Strain:XL10) 内にLacR有がTetR無い
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***XL10内にLacRは有るがTetR無い
***よってLacPはある程度抑制されているがTetPは抑制されていない
***よってLacPはある程度抑制されているがTetPは抑制されていない
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***すなわちプロモーターの差でした
*Notes
*Notes
**XL10はAHLをあまりつくらないことを後から知った．田代さん達の実験データよりBW25113とかHB101が良い
**XL10はAHLをあまりつくらないことを後から知った．田代さん達の実験データよりBW25113とかHB101が良い
== 8/17(Thu) ==
== 8/17(Thu) ==
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8/16の結果を見た．
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== 8/18(Fri) ==
===AHL Expression Test その２===
===AHL Expression Test その２===
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以下のように条件を変えて8/16と同様にAHL伝達テスト．
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*以下のように条件を変えて8/16と同様にAHL伝達テスト．
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*AHL生産量が少ないXL10でやったので'''後からはあまり使わないであろうデータ'''
#プレートを薄くした
#プレートを薄くした
#Senderを濃くした（遠心）
#Senderを濃くした（遠心）
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#Recieverの濃度ふった
#Recieverの濃度ふった
#*Recieverの濃度が高すぎるとAHL生成量（AHL濃度？）が少なくなる
#*Recieverの濃度が高すぎるとAHL生成量（AHL濃度？）が少なくなる
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*次やること
 
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**Met(AHLのpre-precursur）加えたプレートでAHL生成量増えるかテスト
 
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**Agarの濃度ふる
 
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**Recieverの濃度ふる
 
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== 8/18(Fri) ==
 
== 8/19(Sat) ==
== 8/19(Sat) ==
== 8/20(Sun) ==
== 8/20(Sun) ==
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Revision as of 07:43, 16 September 2007

FliC Group AHL Group

8/17(Thu)

  • pUC-FliCのPCR
F/R FliC-207 FliC-228 FliC-240 FliC-252 FliC-267
FliC-207 ①
FliC-228 ② ③
FliC-240 ④ ⑤ ⑥
FliC-252 ⑦ ⑧ ⑨ ⑩
FliC-267 ⑪ ⑫ ⑬ ⑭ ⑮

8/18(Fri)

8/19(Sat)

8/20(Sun)

8/16(Wed)

AHL Expression Test

BiobrickのAHLsender&recieverを使ってシグナル伝達してるかテスト

  • 使用したパーツ
    • Reciever: [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (TetP-LuxR-T-LuxP-GFP-T)
    • Sender1:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03608 BBa_S03608] (LacP-LuxI)
    • Sender2:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI)
    • Strain:XL10
  • 条件
    • 液体培地(LB-Amp)
    • 固体培地(LB-Amp/1.5% Agar)
    • SwarmPlate(Triptone-Amp/0.25% Agar)
  • 実験結果
    • GFP発現した．AHLで伝達している．
    • Sender2・[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI) の方がAHL放出量が多い
      • XL10内にLacRは有るがTetR無い
      • よってLacPはある程度抑制されているがTetPは抑制されていない
      • すなわちプロモーターの差でした
  • Notes
    • XL10はAHLをあまりつくらないことを後から知った．田代さん達の実験データよりBW25113とかHB101が良い

8/17(Thu)

8/16の結果を見た．

8/18(Fri)

AHL Expression Test その２

  • 以下のように条件を変えて8/16と同様にAHL伝達テスト．
  • AHL生産量が少ないXL10でやったので後からはあまり使わないであろうデータ
  1. プレートを薄くした
  2. Senderを濃くした（遠心）
    • Senderの濃度をあげてもある程度（どれくらい？）でAHLの濃度は収束する
  3. Recieverの濃度ふった
    • Recieverの濃度が高すぎるとAHL生成量（AHL濃度？）が少なくなる

8/19(Sat)

8/20(Sun)

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