Chiba/Week1

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FliC Group AHL Group

Contents

8/17(Thu)

  • pUC-FliCのPCR
F/R FliC-207 FliC-228 FliC-240 FliC-252 FliC-267
FliC-207 ①
FliC-228 ② ③
FliC-240 ④ ⑤ ⑥
FliC-252 ⑦ ⑧ ⑨ ⑩
FliC-267 ⑪ ⑫ ⑬ ⑭ ⑮


Recipe(単位：μ) ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧ ⑨ ⑩ ⑪ ⑫ ⑬ ⑭ ⑮
pUC19-FliC 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
FliC-207F 5
FliC-207R 5 5 5 5 5
FliC-228F 5 5
FliC-228R 5 5 5 5
FliC-240F 5 5 5
FliC-240R 5 5 5
FliC-252F 5 5 5 5
FliC-252R 5 5
FliC-267F 5 5 5 5 5
FliC-267R 5
10×Buffer 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
dNTPmix 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10
Vent 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
dH2O 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68 68
Total 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100

8/18(Fri)

8/19(Sat)

8/20(Sun)

8/16(Wed)

AHL Expression Test

BiobrickのAHLsender&recieverを使ってシグナル伝達してるかテスト．

  • 使用したパーツ
    • Reciever: [http://partsregistry.org/Part:BBa_T9002 BBa_T9002] (TetP-LuxR-T-LuxP-GFP-T)
    • Sender1:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03608 BBa_S03608] (LacP-LuxI)
    • Sender2:[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI)
  • 条件
    • Strain:XL10
    • 液体培地(LB-Amp)
    • 固体培地(LB-Amp/1.5% Agar)
    • SwarmPlate(Triptone-Amp/0.25% Agar)
  • 実験結果
    • （福富くんに聞く)
    • Sender2・[http://partsregistry.org/Part:BBa_S03623 BBa_S03623] (TetP-LuxI) の方がAHL放出量が多い
      • 使ったE.coli（Strain:XL10) 内にLacR有がTetR無い
      • よってLacPはある程度抑制されているがTetPは抑制されていない
  • Notes
    • XL10はAHLをあまりつくらないことを後から知った．田代さん達の実験データよりBW25113とかHB101が良い

8/17(Thu)

AHL Expression Test その２

以下のように条件を変えて8/16と同様にAHL伝達テスト．

  1. プレートを薄くした
  2. Senderを濃くした（遠心）
    • Senderの濃度をあげてもある程度（どれくらい？）でAHLの濃度は収束する
  3. Recieverの濃度ふった
    • Recieverの濃度が高すぎるとAHL生成量（AHL濃度？）が少なくなる
  • 次やること
    • Met(AHLのpre-precursur）加えたプレートでAHL生成量増えるかテスト
    • Agarの濃度ふる
    • Recieverの濃度ふる

8/18(Fri)

8/19(Sat)

8/20(Sun)

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