Chiba/Making Marimo

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*flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ?
*flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ?
*ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
*ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
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*ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない?by とよたろ
==Making Marimos==
==Making Marimos==
1.2.3をくっつけてマリモをつくる!の図.
1.2.3をくっつけてマリモをつくる!の図.

Revision as of 22:57, 26 October 2007

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(このページの存在意義について話し合いたいです古)

  • クオラムとfliC-hisを合体させた実験てやりました?
  • やってないです・・・・
  • flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ?
  • ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
  • ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない?by とよたろ

Making Marimos

1.2.3をくっつけてマリモをつくる!の図.

Parts Construction

FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素(__)が入っているため,シグナル側のプラスミドとは分けた.

FliC-His generator

  • His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。
  • Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。

FliC-his biobrick

必要なこと

  • puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
  • 制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
  • FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。
#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
#vector側も同様にPCRしLigationさせる。


Experiments

Stick-or-not Assay

Sample

  • Plux-fliC
  • Pbad-fliC
  • ここのデータは誰が担当かな?どこまでデータが出せる?byとよたろ

Results

  1. Swarm test
  2. Stick test