Chiba/Making Marimo

From 2007.igem.org

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*Change puc19 vector into biobrick's vector.
*Change puc19 vector into biobrick's vector.
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<br>puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
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(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)
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*Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).
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*Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)
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<br>制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
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*Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.
*Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.
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#Similarly do PCR and ligation in the vector side.
#Similarly do PCR and ligation in the vector side.
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<br>FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。
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(FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。
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#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
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#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
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#vector側も同様にPCRしLigationさせる。
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#vector側も同様にPCRしLigationさせる。)
==Experiments==
==Experiments==

Revision as of 00:16, 27 October 2007

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Introduction | Project Design ( 1.Sticky Hands | 2.Communication | 3.Size Control ) | Making Marimos | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿

(このページの存在意義について話し合いたいです古)

  • クオラムとfliC-hisを合体させた実験てやりました?
  • やってないです・・・・
  • flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ?
  • ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
  • ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない?by とよたろ

Making Marimos

1.2.3をくっつけてマリモをつくる!の図.<-Our goal??

Parts Construction

FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素(__)が入っているため,シグナル側のプラスミドとは分けた.
Because FliC have restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI)used in Biobrick, we divide into plasmid of FliC and one of signal.

FliC-His generator

  • His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。

We regulate His-tagged FliC by lux promoter. If LuxR is expressed, bacteria can express FliC by Quorum Seinsing.

  • Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。

FliC-his biobrick

What is needed(必要なこと)

  • Change puc19 vector into biobrick's vector.

(puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。)

  • Broken restriction sites of enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).(制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。)
  • Can't insert vector directly,because FliC-His contains EcoRI,SpeI,PstI.
  1. Insert blunt end on one side and ApaI on the other side.
  2. Similarly do PCR and ligation in the vector side.

(FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。

  1. 片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
  2. vector側も同様にPCRしLigationさせる。)

Experiments

Stick-or-not Assay

Sample

  • Plux-fliC
  • Pbad-fliC
  • ここのデータは誰が担当かな?どこまでデータが出せる?byとよたろ

Results

  1. Swarm test
  2. Stick test