Chiba/Making Marimo

From 2007.igem.org

(Difference between revisions)

Revision as of 23:47, 26 October 2007

Introduction | Project Design ( 1.Sticky Hands | 2.Communication | 3.Size Control ) | Making Marimos | Our Goal || Team Members | メンバ連絡簿

（このページの存在意義について話し合いたいです古）

クオラムとfliC-hisを合体させた実験てやりました？
やってないです・・・・
flic-his generator & flic-his biobrickは作りましたっけ？
ligationがうまくいかず、そこで止まってしまいました。
ってことはPCRまではいっているということなら、このページのExperimentとして入れていいんじゃない？by とよたろ

Making Marimos

1.2.3をくっつけてマリモをつくる！の図．<-Our goal??

Parts Construction

FliC内にはBiobrickで使用する制限酵素（＿＿）が入っているため，シグナル側のプラスミドとは分けた．
Because FliC have restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI)used in Biobrick, we divide into plasmid of FliC and one of signal.

FliC-His generator

His-tagを入れたFliCをpLuxの下に置き、LuxRが発現されている条件のもとならば、Quorum SensingでFliCを発現させることができるようにする。

We regulate His-tagged FliC by lux promoter. If LuxR is expressed, bacteria can express FliC by Quorum Seinsing.

Quorum Sensingのための遺伝子回路がcolEI oriのvectorに乗っているために、p15Aのベクターを使いdouble transformation することでQuorum Sensingと合わせることができるようになる。

FliC-his biobrick

What is needed(必要なこと)

FliC-His's vector change puc19 to biobrick's vector.

puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。

Broken the site of restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).

制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。

FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。

#片側をblunt end もう一方をApaIの制限酵素サイトをつけ、PCRする。
#vector側も同様にPCRしLigationさせる。

Experiments

Stick-or-not Assay

Sample

Plux-fliC
Pbad-fliC
ここのデータは誰が担当かな？どこまでデータが出せる？byとよたろ

Results

Swarm test
Stick test

@@ Line 25: / Line 25: @@
 ===[[Chiba/Flagella/FliC-His_Biobrick|FliC-his biobrick]]===
-必要なこと
+What is needed(必要なこと)
-*puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
-*制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
+*FliC-His's vector change puc19 to biobrick's vector.
+<br>puc19 vectorの乗っているのでbiobrickのベクターに乗せる。
+*Broken the site of restriction enzyme(EcoRI,SpeI,PstI).
+<br>制限酵素サイト(EcoRI,SpeI,PstI)をつぶす。
 *FliC His-TagにはEcoRI,SpeI,PstIが含まれているために、そのままではvectorに入れられない。

Views

Personal tools